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谷氨酰胺(Gln)含量試劑盒微量法/48樣
測(cè)定原理
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器
試劑盒組分與配制
測(cè)定意義
谷氨酰胺（Gln）是蛋白質(zhì)合成的重要組成部分，在生物體內(nèi)主要以游離態(tài)和結(jié)合態(tài)兩種狀態(tài)存在，游離谷氨酰胺在機(jī)體代謝過(guò)程中起著重要作用，同時(shí)也是三羧酸循環(huán)中α-酮戊二酸的主要來(lái)源，在能量代謝中發(fā)揮重要作用，可通過(guò)糖酵解和三羧酸循環(huán)途徑參與能量的產(chǎn)生與供應(yīng)。
測(cè)定原理
游離谷氨酰胺在谷氨酰胺酶的催化作用下轉(zhuǎn)變?yōu)楣劝彼?，谷氨酸脫氫酶催化谷氨酸和NAD生成α-酮戊二酸、NADH和NH4+，在1-mPMS作用下，WST-8能夠與NADH反應(yīng)生成水溶性Formazan，產(chǎn)物在450 nm處具有特征吸收峰，根據(jù)吸光值變化即可定量檢測(cè)谷氨酰胺的含量。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器
臺(tái)式離心機(jī)、酶標(biāo)儀、96孔板、可調(diào)式移液槍、研缽、恒溫水浴鍋/培養(yǎng)箱和蒸餾水。
試劑盒組分與配制
提取液：液體60 mL×1瓶，4℃保存。
試劑一：液體500μL×1支，-20℃避光保存。使用時(shí)分裝凍存，避免反復(fù)凍融。
試劑二：液體500μL×1支，4℃保存。
試劑三：粉劑×1瓶，-20℃避光保存。臨用前加入5mL蒸餾水混勻溶解，分裝凍存，避免反復(fù)凍融。
試劑四：液體1.5mL×1瓶，-20℃避光保存。分裝凍存，避免反復(fù)凍融。
試劑五：液體1.5mL×1瓶，-20℃避光保存。
試劑六：液體1.5mL×1瓶，-20℃避光保存。
試劑七：液體12mL×1瓶，4℃保存。
標(biāo)準(zhǔn)品：粉劑×1瓶，4℃避光保存。
注意
注意
正式測(cè)定前務(wù)必取 3 - 5 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定。
預(yù)實(shí)驗(yàn)的意義
預(yù)實(shí)驗(yàn)的意義
比色法檢測(cè)試劑盒預(yù)實(shí)驗(yàn)非常重要
1、確定該試劑盒是否適合客戶(hù)的樣本檢測(cè)，以免造成試劑盒和樣本的浪費(fèi)（比如低表達(dá)處理的樣本）；
2、熟悉生化試劑盒的操作流程，尤其是初次使用生化試劑盒測(cè)定；
3、確定樣本的處理方法及稀釋倍數(shù)是否合適；
4、了解實(shí)驗(yàn)過(guò)程中可能出現(xiàn)的實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象或問(wèn)題，以便于及時(shí)作出調(diào)整；
5、通過(guò)3 - 5組預(yù)實(shí)驗(yàn)，判斷試劑盒對(duì)于樣本的最佳適應(yīng)稀釋濃度范圍，指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)樣本稀釋比例。
