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肉毒堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶Ⅰ(CPT-1)活性試劑盒微量法/96樣
測定原理
自備儀器和用品
試劑的組成
測定意義
肉毒堿棕櫚?；D(zhuǎn)移酶（Carnitinepalmitoyl transferase, CPT；EC 2.3.1.21）分為CPT-Ⅰ和CPT-Ⅱ兩類。CPT-Ⅰ是脂肪酸β氧化過程中的限速酶，位于線粒體外膜，催化長鏈脂肪酸從?；o酶A轉(zhuǎn)移到肉毒堿上，進而從胞漿進入線粒體內(nèi)部，并且進一步在位于線粒體內(nèi)膜上的CPT-Ⅱ催化下進行β氧化。肉毒堿棕櫚酰轉(zhuǎn)移酶的功能異?？赡軐?dǎo)致脂肪酸代謝紊亂，進而引起一系列的代謝性疾病。
測定原理
肉堿和棕櫚酰輔酶A在肉堿脂酰轉(zhuǎn)移酶（CPT-I）的作用下，產(chǎn)生脂酰肉堿，并釋放出游離輔酶A（COA-SH）， 與Ellman試劑DTNB反應(yīng)后，產(chǎn)生黃色的TNB。通過其吸收峰值的變化（412nm），來計算CPT-I的活性。
自備儀器和用品
酶標儀、臺式離心機、可調(diào)式移液器、96孔板、研缽、冰、水浴鍋和蒸餾水。
試劑的組成
提取液A: 液體110mL×1瓶，-20℃保存；
提取液B: 液體22mL×1瓶，-20℃保存；
提取液C: 液體0.6mL×3支，-20℃避光保存；
試劑一：液體12mL×1瓶，-20℃避光保存；
試劑二：液體12mL×1瓶，-20℃避光保存；
試劑三：液體4mL×1瓶，-20℃避光保存。
注意
注意
正式測定前務(wù)必取 3 - 5 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定。
預(yù)實驗的意義
比色法檢測試劑盒預(yù)實驗非常重要
1、確定該試劑盒是否適合客戶的樣本檢測，以免造成試劑盒和樣本的浪費（比如低表達處理的樣本）；
2、熟悉生化試劑盒的操作流程，尤其是初次使用生化試劑盒測定；
3、確定樣本的處理方法及稀釋倍數(shù)是否合適；
4、了解實驗過程中可能出現(xiàn)的實驗現(xiàn)象或問題，以便于及時作出調(diào)整；
5、通過3 - 5組預(yù)實驗，判斷試劑盒對于樣本的最佳適應(yīng)稀釋濃度范圍，指導(dǎo)實驗樣本稀釋比例。
