測定意義

NO（Nitric Oxide，NO）廣泛分布于生物體內神經(jīng)、循環(huán)、呼吸、消化、泌尿生殖等系統(tǒng)中，特別是神經(jīng)組織中較豐富。它作為細胞間及細胞內的信息物質，發(fā)揮信號傳遞的作用，是一種新型的生物信使分子，在機體的生理、病理過程中起著重要的作用。

測定原理

NO在體內或水溶液中極易氧化變?yōu)橄跛猁}和亞硝酸鹽，通過硝酸鹽還原酶還原硝酸鹽為亞硝酸鹽后，在酸性條件下，亞硝酸鹽—與重氮鹽磺酸胺生成重氮化合物，進一步與萘基乙烯基二胺偶合，產(chǎn)物在550nm處有特征吸收峰，測定其吸光值，可以計算NO含量。

所需的儀器和用品

天平、研缽或勻漿器、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96孔板、蒸餾水。

試劑盒組分與配制

提取液：液體110mL×1瓶，4℃保存。

試劑一：粉劑x1支，-20℃避光保存。臨用前加入1mL蒸餾水

試劑二：粉劑x1支，-20℃避光保存。臨用前加入1mL蒸餾水

試劑三：液體55μLx1支，-20℃保存。，臨用前稀釋10倍，避免反復凍融

試劑四：液體1.5mLx1支，4℃避光保存。

試劑五：液體110μLx1支，-20℃保存。臨用前稀釋10倍，避免反復凍融

試劑六：液體6mL×1瓶，4℃避光保存。（如有析出，可以60℃加熱震蕩15min）試劑七：液體6mL×1瓶，4℃避光保存。(用之前60℃加熱震蕩15min)

標準品：液體1mLx1支，4℃避光保存。(10μmol/mL 亞硝酸鈉)

注意

正式測定前務必取 3 - 5 個預期差異較大的樣本做預測定。

預實驗的意義

比色法檢測試劑盒預實驗非常重要

1、確定該試劑盒是否適合客戶的樣本檢測，以免造成試劑盒和樣本的浪費（比如低表達處理的樣本）；

2、熟悉生化試劑盒的操作流程，尤其是初次使用生化試劑盒測定；

3、確定樣本的處理方法及稀釋倍數(shù)是否合適；

4、了解實驗過程中可能出現(xiàn)的實驗現(xiàn)象或問題，以便于及時作出調整；

5、通過3 - 5組預實驗，判斷試劑盒對于樣本的最佳適應稀釋濃度范圍，指導實驗樣本稀釋比例。

ELISA試劑盒

PCR試劑盒