氧化型谷胱甘肽含量(熒光法)試劑盒微量法/48樣
自備儀器和用品
試劑的組成和配制
測定意義
谷胱甘肽(Glutathione)是一種生物體內(nèi)廣泛存在的含硫醇三肽化合物,參與多種重要的生理過程,可保護細胞免遭氧化損傷,解除藥物代謝產(chǎn)物的毒性。谷胱甘肽在細胞中主要以還原型谷胱甘肽(ReducedGlutathione,GSH)和氧化型谷胱甘肽(OxidiedGlutathione,GSSG)兩種形式存在。
測定原理
GSH可以與單氯二胺反應生成熒光物質(zhì),所測熒光值代入標準曲線可計算GSH含量,加入還原試劑后,GSSG被還原成GSH,從而測定樣本中總的谷胱甘肽含量??偟墓入赘孰暮繙p去GSH含量即為GSSG含量。
自備儀器和用品
低溫離心機、可調(diào)節(jié)移液器、蒸餾水、pH試紙、熒光酶標儀(激發(fā)波長390nm,發(fā)射波長490nm)、恒溫箱。
試劑的組成和配制
生理鹽水:液體60ml×1瓶,4℃保存。
酸性提取液:液體10ml×1瓶,4℃保存。
堿性提取液:液體10ml×1瓶,4℃保存。
試劑一:液體60ml×1瓶,4℃保存。
試劑二:液體×2支,-20℃避光保存。每支臨用前加入1.2mL蒸餾水混勻。未使用完的試劑二可-20°C避光保存7天。
試劑三:粉劑×2支,-20℃避光保存。每支臨用前加入1.2mL蒸餾水混勻。未使用完的試劑三可-20°C避光保存7天。
試劑四:液體×1支,-20℃避光保存。
標準品:粉劑×1瓶,-20℃避光保存。
黑色96孔酶標板×1
注意
注意
正式測定前務必取 3 - 5 個預期差異較大的樣本做預測定。
預實驗的意義
預實驗的意義
比色法檢測試劑盒預實驗非常重要
1、確定該試劑盒是否適合客戶的樣本檢測,以免造成試劑盒和樣本的浪費(比如低表達處理的樣本);
2、熟悉生化試劑盒的操作流程,尤其是初次使用生化試劑盒測定;
3、確定樣本的處理方法及稀釋倍數(shù)是否合適;
4、了解實驗過程中可能出現(xiàn)的實驗現(xiàn)象或問題,以便于及時作出調(diào)整;
5、通過3 - 5組預實驗,判斷試劑盒對于樣本的最佳適應稀釋濃度范圍,指導實驗樣本稀釋比例。
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