總膽汁酸含量試劑盒(酶循環(huán)比色法)試劑盒100管/96樣
測定意義
TBA由肝臟分解代謝,其血清濃度升高反映肝實質(zhì)性損傷。因此,TBA測定用于監(jiān)測慢性肝病價值很大。
測定原理
膽汁酸被3a-羥甾醇脫氫酶(3a-HSD)以及氧化型β-硫代煙酰胺脲嘌呤二核苷酸(Thio-NAD)特異性氧化,生成3-酮類固醇以及還原型β-硫代煙酰胺脲嘌呤二核苷酸(Thio-NADH)。生成的3-酮類固醇在3a-羥甾醇脫氫酶及還原型β-煙酰胺脲嘌呤二核苷酸(Thio-NADH)存在下,再生成膽汁酸及氧化型β-煙酰胺脲嘌呤二核苷酸(NAD)。
如上所述循環(huán)放大使檢測靈敏度提高。測定在單位時間內(nèi)生成的還原型β-硫代煙酰胺脲嘌呤二核苷酸(Thio-NADH)在405nm.處的吸光度變化,以求得膽汁酸的含量。
需自備的儀器和用品
可見分光光度計/酶標(biāo)儀、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、蒸餾水。
試劑的組成和配制
試劑一:液體20mLx1瓶,-20℃避光保存;
試劑一:5mL×1瓶,-20℃避光保存;
標(biāo)準(zhǔn)管:液體1mLx1支,4℃避光保存;濃度為1mmol/L。臨用前用蒸餾水稀釋至50μmol/L;
注意
正式測定前務(wù)必取 3 - 5 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定。
預(yù)實驗的意義
比色法檢測試劑盒預(yù)實驗非常重要
1、確定該試劑盒是否適合客戶的樣本檢測,以免造成試劑盒和樣本的浪費(比如低表達(dá)處理的樣本);
2、熟悉生化試劑盒的操作流程,尤其是初次使用生化試劑盒測定;
3、確定樣本的處理方法及稀釋倍數(shù)是否合適;
4、了解實驗過程中可能出現(xiàn)的實驗現(xiàn)象或問題,以便于及時作出調(diào)整;
5、通過3 - 5組預(yù)實驗,判斷試劑盒對于樣本的最佳適應(yīng)稀釋濃度范圍,指導(dǎo)實驗樣本稀釋比例。
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