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髓過氧化物酶活性檢測試劑盒24樣分光法
測定意義
測定意義
髓過氧化物酶（MPO）是一種由活化的中性粒細(xì)胞、單核-巨噬細(xì)胞分泌的白細(xì)胞酶，主要存在于中性粒細(xì)胞和單核-巨噬細(xì)胞的嗜苯胺藍(lán)顆粒中，作為系統(tǒng)炎癥和氧化應(yīng)激的標(biāo)志物，在免疫和炎癥過程中發(fā)揮重要作用，并參與抗菌、免疫調(diào)節(jié)和氧化應(yīng)激等生理過程。
測定原理
髓過氧化物酶可催化H2O2分解，同時將鄰聯(lián)茴香胺氧化生成有色物質(zhì)，產(chǎn)物在460 nm處具有特征吸收峰，通過吸光值變化即可表征髓過氧化物酶的活性。
需自備的儀器和用品
可見分光光度計、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、水浴鍋和蒸餾水。
測定步驟和加樣表
測定步驟和加樣表
1.分光光度計預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至460nm，蒸餾水調(diào)零。
2.工作液的配制：根據(jù)使用量按試劑一：試劑四：試劑五=960:40:1的體積比配
制，充分混勻即為檢測工作液。
3.在1.5mLEP管中依次加入：
注意
如果ΔA小于0.02，可延長反應(yīng)時間或增加樣本量。如果ΔA大于0.5，可將樣本待測液用試劑二稀釋后測定，計算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
預(yù)實驗的意義
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試劑名稱(μL) |
測定管 |
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樣本 |
10 |
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試劑二 |
40 |
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工作液 |
875 |
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混勻，移至1mL比色皿中記錄25℃，450nm下的初始吸光值A(chǔ)1和30min后的吸光值A(chǔ)2。計算ΔA＝A2-A1 |
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注意
如果ΔA小于0.02，可延長反應(yīng)時間或增加樣本量。如果ΔA大于0.5，可將樣本待測液用試劑二稀釋后測定，計算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
預(yù)實驗的意義
比色法檢測試劑盒預(yù)實驗非常重要
1、確定該試劑盒是否適合客戶的樣本檢測，以免造成試劑盒和樣本的浪費（比如低表達(dá)處理的樣本）；
2、熟悉生化試劑盒的操作流程，尤其是初次使用生化試劑盒測定；
3、確定樣本的處理方法及稀釋倍數(shù)是否合適；
4、了解實驗過程中可能出現(xiàn)的實驗現(xiàn)象或問題，以便于及時作出調(diào)整；
5、通過3 - 5組預(yù)實驗，判斷試劑盒對于樣本的最佳適應(yīng)稀釋濃度范圍，指導(dǎo)實驗樣本稀釋比例。
