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021-54845833/15800441009
總磷酸二酯酶(PDEs)活性試劑盒微量法/48樣
測(cè)定意義
磷酸二酯酶（phosphodiesterase, PDEs）具有水解細(xì)胞內(nèi)第二信使（環(huán)磷酸腺苷或環(huán)磷酸鳥苷）的功能，降解細(xì)胞內(nèi)環(huán)磷酸腺苷或磷酸鳥苷，從而終結(jié)這些第二信使所傳導(dǎo)的生化作用。
測(cè)定原理
磷酸二酯酶(PDEs)催化底物雙(4-硝基苯)磷酯（BNPP）分解生成黃色的產(chǎn)物 PNP，該產(chǎn)物在 405nm 處有最大吸收峰。通過檢測(cè) PNP 在 405nm 下的增加速率，計(jì)算磷酸二酯酶（PDEs）的活性。
需自備的儀器和用品
酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、96孔板、研缽、生理鹽水、水浴鍋和蒸餾水。
試劑的組成和配制
試劑一：粉劑×1瓶， -20℃避光保存。臨用前加入6mL試劑二溶解；
試劑二：液體20mL×1瓶，4℃保存；
試劑三：液體10mL×1瓶，4℃避光保存。
標(biāo)準(zhǔn)品：粉劑×1瓶， -20℃避光保存。
注意
正式測(cè)定前務(wù)必取 3 - 5 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定。
預(yù)實(shí)驗(yàn)的意義
比色法檢測(cè)試劑盒預(yù)實(shí)驗(yàn)非常重要
1、確定該試劑盒是否適合客戶的樣本檢測(cè)，以免造成試劑盒和樣本的浪費(fèi)（比如低表達(dá)處理的樣本）；
2、熟悉生化試劑盒的操作流程，尤其是初次使用生化試劑盒測(cè)定；
3、確定樣本的處理方法及稀釋倍數(shù)是否合適；
4、了解實(shí)驗(yàn)過程中可能出現(xiàn)的實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象或問題，以便于及時(shí)作出調(diào)整；
5、通過3 - 5組預(yù)實(shí)驗(yàn)，判斷試劑盒對(duì)于樣本的最佳適應(yīng)稀釋濃度范圍，指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)樣本稀釋比例。
