測(cè)定意義

一氧化氮合成酶（NitricOxideSynthase，NOS，EC 1.14.13.39）是生物體內(nèi)催化L-精氨酸合成NO的一類酶，主要存在于血管平滑肌、巨噬細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、肝細(xì)胞、腎小球膜細(xì)胞等各種細(xì)胞中。NO作為細(xì)胞信息分子，在神經(jīng)系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)和心血管系統(tǒng)中起著重要的調(diào)節(jié)作用。

根據(jù)其酶活性對(duì)鈣離子的依賴性不同，分為結(jié)構(gòu)型NOS（constitutiveNOS，cNOS）和損傷誘導(dǎo)型NOS（inducible NOS，iNOS），前者需要一定濃度的鈣離子方可激活，后者不依賴于外源鈣離子。

測(cè)定原理

NOS催化L-精氨酸、分子氧和NADPH，生成NO和NADP+，NO在水溶液中極易氧化生成NO2-和NO3-。在酸性條件下，NO2-與重氮鹽磺酸胺生成重氮化合物，進(jìn)一步與萘基乙烯基二胺偶合，產(chǎn)物在550nm處有特征吸收峰，測(cè)定其吸光值，可以計(jì)算得到NOS活性大小。

需自備的儀器和用品

可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、蒸餾水。

試劑的組成和配制

試劑名稱	規(guī)格	保存條件	備注
提取液一	液體60mLx1	-20℃保存
提取液二	液體1mLx2	-20℃密封保存
緩沖液	液體20mLx1	2-8℃保存
試劑一	粉劑x1	2-8℃避光保存	臨用前加入15mL緩沖液溶解
試劑二	液體1.5mLx1	-20℃避光保存
試劑三	粉劑x1	-20℃避光保存	臨用前加1mL緩沖液溶解
試劑四	粉劑x1	-20℃避光保存	臨用前加1mL緩沖液溶解
試劑五	液體6mLx1	2-8℃避光保存	如有析出，可適當(dāng)加熱溶解
試劑六	液體6mLx1	2-8℃避光保存	用之前60℃加熱震蕩15min
試劑七	液體1mLx1	-20℃避光保存
標(biāo)準(zhǔn)品	液體1mLx1	2-8℃避光保存	10μmol/mL亞硝酸鈉

注意

正式測(cè)定前務(wù)必取 3 - 5 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定。

預(yù)實(shí)驗(yàn)的意義

比色法檢測(cè)試劑盒預(yù)實(shí)驗(yàn)非常重要

1、確定該試劑盒是否適合客戶的樣本檢測(cè)，以免造成試劑盒和樣本的浪費(fèi)（比如低表達(dá)處理的樣本）；

2、熟悉生化試劑盒的操作流程，尤其是初次使用生化試劑盒測(cè)定；

3、確定樣本的處理方法及稀釋倍數(shù)是否合適；

4、了解實(shí)驗(yàn)過程中可能出現(xiàn)的實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象或問題，以便于及時(shí)作出調(diào)整；

5、通過3 - 5組預(yù)實(shí)驗(yàn)，判斷試劑盒對(duì)于樣本的最佳適應(yīng)稀釋濃度范圍，指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)樣本稀釋比例。

021-54845833/15800441009

ELISA試劑盒

PCR試劑盒

生化試劑盒

農(nóng)殘檢測(cè)試劑盒

細(xì)胞庫

基礎(chǔ)培養(yǎng)基

完全培養(yǎng)基

原代細(xì)胞

細(xì)胞專用培養(yǎng)基

細(xì)胞系

菌株

生化試劑

病理染色液

科研抗體

標(biāo)準(zhǔn)品

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細(xì)胞凋亡與檢測(cè)

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