阿魏酸酯酶活性試劑盒100管/96樣
測定原理
所需的儀器和用品
試劑盒組分與配制
測定意義
阿魏酸酯酶(FAE,EC 3.1.1.73),又稱肉桂酸酯酶或肉桂酸水解酶,是一種胞外羧酸酯酶,能夠水解植物細(xì)胞壁中阿魏酸與多糖或木質(zhì)素之間的酯鍵,釋放游離阿魏酸并促進多糖降解。
NADPH 氧化酶(NAO)將 NADPH 氧化為 NADP+的同時生成超氧陰離子(O2 .- ),接著與顯色劑反應(yīng)生成水溶性的黃色物質(zhì)。對照通過添加該酶的特異性抑制劑 DPI 排除背景值。最終檢測生成的有色物質(zhì)在 450nm 處的吸光值,即可計算得出 NAO 酶活性大小。
測定原理
阿魏酸酯酶(FAE)催化底物阿魏酸甲酯分解,通過檢測阿魏酸甲酯于340nm的下降速率即可得出阿魏酸酯酶(FAE)酶活力大小。
所需的儀器和用品
可見分光光度計/酶標(biāo)儀、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、無水乙醇、蒸餾水
試劑盒組分與配制
提取液:液體120mLx1瓶,4℃保存;
試劑一:液體15mLx1瓶,4℃保存;
試劑二:粉劑×1瓶,4℃避光保存,臨用前加入4mL無水乙醇溶解;
標(biāo)準(zhǔn)品:粉劑x1支,若重做標(biāo)曲,則用到該試劑,4℃避光保存;
注意
注意
正式測定前務(wù)必取 3 - 5 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定。
預(yù)實驗的意義
預(yù)實驗的意義
比色法檢測試劑盒預(yù)實驗非常重要
1、確定該試劑盒是否適合客戶的樣本檢測,以免造成試劑盒和樣本的浪費(比如低表達處理的樣本);
2、熟悉生化試劑盒的操作流程,尤其是初次使用生化試劑盒測定;
3、確定樣本的處理方法及稀釋倍數(shù)是否合適;
4、了解實驗過程中可能出現(xiàn)的實驗現(xiàn)象或問題,以便于及時作出調(diào)整;
5、通過3 - 5組預(yù)實驗,判斷試劑盒對于樣本的最佳適應(yīng)稀釋濃度范圍,指導(dǎo)實驗樣本稀釋比例。
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