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總ATP酶活性試劑盒100管/48樣
測(cè)定原理
需自備的儀器和用品
試劑的組成和配制
測(cè)定意義
ATP酶分解ATP生成ADP及無(wú)機(jī)磷，通過(guò)測(cè)定無(wú)機(jī)磷的量來(lái)確定ATP酶活性。
測(cè)定原理
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
需自備的儀器和用品
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制
提取液：液體100mL ×1 瓶，4℃保存。
試劑一：液體 10mL×1 瓶，4℃保存。
試劑二：粉劑×1瓶，-20℃保存；臨用前加入6mL蒸餾水充分混勻待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
試劑三：液體 2mL×1 瓶，4℃保存。
試劑四：粉劑×1瓶，4℃保存。用時(shí)加入3mL蒸餾水， 4℃保存。
試劑五：粉劑×1瓶, 4℃避光保存。用時(shí)加入25mL蒸餾水，溶解后4℃保存一周。
試劑六：粉劑×1瓶, 4℃避光保存。用時(shí)加入25mL蒸餾水，溶解后4℃保存一周。
試劑七：液體25mL×1 瓶，室溫保存。
試劑八：10mmol/L 標(biāo)準(zhǔn)磷貯備液 10mL×1 瓶，4℃保存。
0.5μmol/mL 標(biāo)準(zhǔn)磷應(yīng)用液配制：將試劑八 20倍稀釋，即取 0.1mL試劑八加1.9mL蒸餾水充分混勻。
定磷劑的配制：按蒸餾水: 試劑五:試劑六:試劑七=2:1:1:1 的比例配制，配好的定磷劑應(yīng)為淺黃色。若無(wú)色則試劑失效，若是藍(lán)色則為磷污染，定磷劑現(xiàn)用現(xiàn)配。
注意
預(yù)實(shí)驗(yàn)的意義
注意
正式測(cè)定前務(wù)必取 3 - 5 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定。
比色法檢測(cè)試劑盒預(yù)實(shí)驗(yàn)非常重要
1、確定該試劑盒是否適合客戶的樣本檢測(cè)，以免造成試劑盒和樣本的浪費(fèi)（比如低表達(dá)處理的樣本）；
2、熟悉生化試劑盒的操作流程，尤其是初次使用生化試劑盒測(cè)定；
3、確定樣本的處理方法及稀釋倍數(shù)是否合適；
4、了解實(shí)驗(yàn)過(guò)程中可能出現(xiàn)的實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象或問(wèn)題，以便于及時(shí)作出調(diào)整；
5、通過(guò)3 - 5組預(yù)實(shí)驗(yàn)，判斷試劑盒對(duì)于樣本的最佳適應(yīng)稀釋濃度范圍，指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)樣本稀釋比例。
