測定意義

ATP廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，是生物能量通貨，能荷是描述細(xì)胞能量代謝狀態(tài)的主要參數(shù)。測定ATP含量并且計算能荷，能夠反映能量代謝狀態(tài)。

測定原理

己糖激酶（HK）催化葡萄糖和ATP生成6-磷酸葡萄糖，后者在6-磷酸葡萄糖脫氫酶作用下生成NADPH。NADPH在電子耦合試劑存在下，將WST-8還原為水溶性橙黃色的formazan，該產(chǎn)物在450nm處有特征吸收峰。

自備實驗用品及儀器

分光光度計/酶標(biāo)儀、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、微量石英比色皿/96孔板、研缽和蒸餾水。

試劑盒組分與配制

酸性提取液：液體60mL×2瓶，4℃保存；

堿性提取液：液體60mL×2瓶，4℃保存；

試劑一：液體1.5mL×1支，-20℃避光保存；

試劑二：液體 20mL×1瓶，-20℃避光保存；

試劑三：液體1.5mLx1支，-20℃避光保存；

試劑四：液體1.5mLx1支，-20℃避光保存；

標(biāo)準(zhǔn)品：粉劑x1支，-20℃避光保存；(臨用前加入985.8μL蒸餾水配成10μmol/mL的ATP標(biāo)準(zhǔn)溶液，然后稀釋20倍配置成0.5μmol/mL的標(biāo)準(zhǔn)液)

注意

正式測定前務(wù)必取 3 - 5 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定。

預(yù)實驗的意義

比色法檢測試劑盒預(yù)實驗非常重要

1、確定該試劑盒是否適合客戶的樣本檢測，以免造成試劑盒和樣本的浪費(fèi)（比如低表達(dá)處理的樣本）；

2、熟悉生化試劑盒的操作流程，尤其是初次使用生化試劑盒測定；

3、確定樣本的處理方法及稀釋倍數(shù)是否合適；

4、了解實驗過程中可能出現(xiàn)的實驗現(xiàn)象或問題，以便于及時作出調(diào)整；

5、通過3 - 5組預(yù)實驗，判斷試劑盒對于樣本的最佳適應(yīng)稀釋濃度范圍，指導(dǎo)實驗樣本稀釋比例。

ELISA試劑盒

PCR試劑盒