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021-54845833/15800441009
測(cè)定意義
肌酸(Creatine)是一種含氮化合物，自然存在于脊椎動(dòng)物體內(nèi)，能夠輔助為肌肉和神經(jīng)細(xì)胞提供能量。肌酸可由精氨酸（arginine)、甘氨酸（glycine）及甲硫氨酸（methionine）三種氨基酸合成，可由人體自行合成，也可以從食物中攝取。肌酸補(bǔ)充劑是一種運(yùn)動(dòng)性能增強(qiáng)劑，也用于治療肌肉和神經(jīng)退行性等疾病，因此肌酸的檢測(cè)在研究和開發(fā)中具有廣泛的應(yīng)用。
測(cè)定原理
肌酸在肌酸酶的作用下生成肌氨酸，肌氨酸在肌氨酸氧化酶的作用下生成過氧化氫，過氧化氫與顯色劑反應(yīng)呈現(xiàn)紫色，該有色物質(zhì)在546nm有最大吸收峰，進(jìn)而計(jì)算得到肌酐含量。
需自備的儀器和用品
可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、蒸餾水。
測(cè)定步驟
測(cè)定步驟
1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，設(shè)置溫度再37℃，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至546nm。
2、在EP管中加入下列試劑：
注意
1.如果ΔA大于1，需要將樣本用蒸餾水稀釋，計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
如果ΔA的值小于0.01，可增加樣本加樣體積V1(如由10uL增至20uL或更多，則試劑二相應(yīng)減少，空白管和標(biāo)準(zhǔn)管變化同測(cè)定管)，或增加樣本取樣質(zhì)量W；則改變后的V1和W需帶入公式重新計(jì)算。
預(yù)實(shí)驗(yàn)的意義
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試劑(μL) |
測(cè)定管 |
空白管(只做一管) |
標(biāo)準(zhǔn)管(只做一管) |
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樣本 |
10 |
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蒸餾水 |
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10 |
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標(biāo)準(zhǔn)品 |
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10 |
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試劑一 |
190 |
190 |
190 |
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混勻，546nm處測(cè)定吸光值A(chǔ)137℃孵育15min后于546nm處讀取吸光值A(chǔ)2ΔA=A2-A1 |
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預(yù)實(shí)驗(yàn)的意義
比色法檢測(cè)試劑盒預(yù)實(shí)驗(yàn)非常重要
1、確定該試劑盒是否適合客戶的樣本檢測(cè)，以免造成試劑盒和樣本的浪費(fèi)（比如低表達(dá)處理的樣本）；
2、熟悉生化試劑盒的操作流程，尤其是初次使用生化試劑盒測(cè)定；
3、確定樣本的處理方法及稀釋倍數(shù)是否合適；
4、了解實(shí)驗(yàn)過程中可能出現(xiàn)的實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象或問題，以便于及時(shí)作出調(diào)整；
5、通過3 - 5組預(yù)實(shí)驗(yàn)，判斷試劑盒對(duì)于樣本的最佳適應(yīng)稀釋濃度范圍，指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)樣本稀釋比例。
