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測(cè)定意義
髓過氧化物酶（MPO）是一種由活化的中性粒細(xì)胞、單核-巨噬細(xì)胞分泌的白細(xì)胞酶，主要存在于中性粒細(xì)胞和單核-巨噬細(xì)胞的嗜苯胺藍(lán)顆粒中，作為系統(tǒng)炎癥和氧化應(yīng)激的標(biāo)志物，在免疫和炎癥過程中發(fā)揮重要作用，并參與抗菌、免疫調(diào)節(jié)和氧化應(yīng)激等生理過程。
測(cè)定原理
髓過氧化物酶可催化H2O2分解，同時(shí)將鄰聯(lián)茴香胺氧化生成有色物質(zhì)，產(chǎn)物在460 nm處具有特征吸收峰，通過吸光值變化即可表征髓過氧化物酶的活性。
需自備的儀器和用品
酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、96孔板、研缽、水浴鍋和蒸餾水。
測(cè)定步驟
測(cè)定步驟
1、酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至460nm，蒸餾水調(diào)零。
2、工作液的配制：根據(jù)使用量按 稀釋10倍的試劑一：試劑四：試劑五=960:40:1的體積比配制，充分混勻即為檢測(cè)工作液。
3、在96孔板中依次加入：
注意
如果ΔA小于0.02，可延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間或增加樣本量。如果ΔA大于0.5，可將樣本待測(cè)液用試劑二稀釋后測(cè)定，計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
預(yù)實(shí)驗(yàn)的意義
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試劑名稱(μL) |
測(cè)定管 |
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樣本 |
10 |
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試劑二 |
40 |
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工作液 |
250 |
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混勻，記錄25℃，450nm下的初始吸光值A(chǔ)1和30min后的吸光值A(chǔ)2。計(jì)算ΔA＝A2-A1 |
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注意
如果ΔA小于0.02，可延長(zhǎng)反應(yīng)時(shí)間或增加樣本量。如果ΔA大于0.5，可將樣本待測(cè)液用試劑二稀釋后測(cè)定，計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
預(yù)實(shí)驗(yàn)的意義
比色法檢測(cè)試劑盒預(yù)實(shí)驗(yàn)非常重要
1、確定該試劑盒是否適合客戶的樣本檢測(cè)，以免造成試劑盒和樣本的浪費(fèi)（比如低表達(dá)處理的樣本）；
2、熟悉生化試劑盒的操作流程，尤其是初次使用生化試劑盒測(cè)定；
3、確定樣本的處理方法及稀釋倍數(shù)是否合適；
4、了解實(shí)驗(yàn)過程中可能出現(xiàn)的實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象或問題，以便于及時(shí)作出調(diào)整；
5、通過3 - 5組預(yù)實(shí)驗(yàn)，判斷試劑盒對(duì)于樣本的最佳適應(yīng)稀釋濃度范圍，指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)樣本稀釋比例。
