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氧基抗氧化能力ORAC檢測(cè)試劑盒
測(cè)定原理
測(cè)定意義
氧基抗氧化能力（OxygenRadicalAbsorbance Capacity, ORAC）是一種檢測(cè)各種樣品中生物分子抗氧 化能力的經(jīng)典方法。ORAC方法對(duì)抗氧化性能的評(píng)價(jià)具有特異性好、靈敏度高、測(cè)定范圍廣，以及適合抗氧 化活性的高通量篩選等優(yōu)點(diǎn)，在天然產(chǎn)物抗氧化提取物中得到越來(lái)越多的應(yīng)用，食品及功能食品企業(yè)普遍采用 ORAC作為功能食品的重要評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)。
測(cè)定原理
以熒光素鈉為熒光探針，偶氮類(lèi)化合物AAPH作為過(guò)氧自由基來(lái)源，根據(jù)自由基破 壞熒光探針，使熒光強(qiáng)度產(chǎn)生變化，熒光強(qiáng)度的變化大小反映自由基破壞的程度。在抗氧化劑存在時(shí)，它可以 抑制由自由基引起的熒光變化，抑制程度反映了它對(duì)自由基的抗氧化能力。
需自備的儀器和用品
天平、丙酮、PBS、離心機(jī)、烘箱、熒光酶標(biāo)儀、黑色96孔板、勻漿器。
試劑組成和配制
注意
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試劑名稱(chēng) |
規(guī)格 |
數(shù)目 |
貯藏 |
備注 |
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提取液 |
液體100mL |
X2 |
4℃ |
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試劑一 |
液體250μL |
x1 |
-20℃,避光 |
臨用前用提取液稀釋100倍，充分混勻，現(xiàn)配現(xiàn)用。用不完的試劑一可以分裝凍存，避免反復(fù)凍融。 |
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試劑二 |
粉劑 |
x1 |
-20℃,避光 |
臨用前，根據(jù)實(shí)驗(yàn)用量自行稱(chēng)取，稱(chēng)取19mg加入1mL提取液混勻溶解，現(xiàn)配現(xiàn)用。 |
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標(biāo)準(zhǔn)品 |
液體500μL |
x1 |
-20℃,避光 |
Trolox (5 mM) ，用不完的標(biāo)準(zhǔn)品可以分裝凍存，避免反復(fù)凍融。 |
注意
正式測(cè)定前務(wù)必取 3 - 5 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定。
預(yù)實(shí)驗(yàn)的意義
預(yù)實(shí)驗(yàn)的意義
比色法檢測(cè)試劑盒預(yù)實(shí)驗(yàn)非常重要
1、確定該試劑盒是否適合客戶的樣本檢測(cè)，以免造成試劑盒和樣本的浪費(fèi)（比如低表達(dá)處理的樣本）；
2、熟悉生化試劑盒的操作流程，尤其是初次使用生化試劑盒測(cè)定；
3、確定樣本的處理方法及稀釋倍數(shù)是否合適；
4、了解實(shí)驗(yàn)過(guò)程中可能出現(xiàn)的實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象或問(wèn)題，以便于及時(shí)作出調(diào)整；
5、通過(guò)3 - 5組預(yù)實(shí)驗(yàn)，判斷試劑盒對(duì)于樣本的最佳適應(yīng)稀釋濃度范圍，指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)樣本稀釋比例。
