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021-54845833/15800441009
輔酶2 NADP(H)含量(WST-8法)檢測試劑盒
測定意義
測定意義
輔酶Ⅱ NADP(H)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，NADP+和 NADPH 含量測定可以計算 NADP （NADPH + NADP+)含量和 NADPH/NADP+比值，其變化與磷酸戊糖途徑和生物合成以及抗氧化反應密切相關。 NADPH/NADP+比值不僅是細胞氧化還原態(tài)的主要標志之一，而且在 PPP 途徑、生物合成和抗氧化代謝中具有重 要調(diào)控作用。
測定原理
分別用提取液提取樣品中NADP+和NADPH。在1-mPMS作用下，WST-8可與NADPH 反應，產(chǎn)生水溶性formazan，在450nm下有特征吸收峰，而NADP+可被6-磷酸葡萄糖脫氫酶還原為NADPH，進一步采用 WST-8 檢測。
需自備的儀器和用品
酶標儀、臺式離心機、可調(diào)式移液器、96孔板、研缽、冰、蒸餾水。
測定步驟
測定步驟
1、酶標儀預熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至450nm。
2、工作液的配制：臨用前按照樣本數(shù)量，按以下比例配制工作液。
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試劑名稱（μL） |
工作液 |
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試劑一 |
100 |
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試劑二 |
50 |
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試劑三 |
10 |
3、樣本測定
按下表在96孔板中加入如下試劑
預實驗的意義
按下表在96孔板中加入如下試劑
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試劑名稱（μL） |
測定管 |
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樣本 |
50 |
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測定工作液 |
150 |
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充分混勻，于450nm下測定吸光值A1，37℃避光孵育30min，450nm下測定吸光值A2，△A=A2-A1。 |
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預實驗的意義
比色法檢測試劑盒預實驗非常重要
1、確定該試劑盒是否適合客戶的樣本檢測，以免造成試劑盒和樣本的浪費（比如低表達處理的樣本）；
2、熟悉生化試劑盒的操作流程，尤其是初次使用生化試劑盒測定；
3、確定樣本的處理方法及稀釋倍數(shù)是否合適；
4、了解實驗過程中可能出現(xiàn)的實驗現(xiàn)象或問題，以便于及時作出調(diào)整；
5、通過3 - 5組預實驗，判斷試劑盒對于樣本的最佳適應稀釋濃度范圍，指導實驗樣本稀釋比例。
注意
注意
正式測定前務必取 3 - 5 個預期差異較大的樣本做預測定。
