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測(cè)定意義
麥芽糖酶是一種水解α-1,4糖苷鍵的α-葡萄糖苷酶，性狀為白色至淺棕黃色粉末。最初定義為催化麥芽糖分解為兩分子葡萄糖的酶，現(xiàn)擴(kuò)展為作用于各類(lèi)α-D-葡萄糖苷的酶類(lèi)。麥芽糖是由兩分子D-葡萄糖通過(guò)α-1,4糖苷鍵連接的二糖，可通過(guò)淀粉酶水解淀粉生成，廣泛應(yīng)用于飴糖、酒精釀造及焙烤工業(yè)。
測(cè)定原理
麥芽糖酶將樣品中麥芽糖水解為葡萄糖; 葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸，并產(chǎn)生過(guò)氧化氫；過(guò)氧化物酶催化過(guò)氧化氫氧化 4-氨基安替比林偶聯(lián)酚，生成有色化合物，在 505nm 有特征吸收峰。
自備儀器和用品
酶標(biāo)儀、水浴鍋、可調(diào)式移液器、96孔板、研缽、冰、和蒸餾水。
試劑清單
預(yù)實(shí)驗(yàn)的意義
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試劑名稱 |
規(guī)格 |
數(shù)目 |
貯藏 |
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試劑一 |
液體75mL |
x1 |
4℃ |
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試劑二 |
液體3mL |
x1 |
-20℃ |
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試劑三 |
液體10mL |
x1 |
4℃,避光 |
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試劑四 |
液體10mL |
x1 |
4℃,避光 |
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試劑五 |
液體10mL |
x1 |
4℃，密封 |
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標(biāo)準(zhǔn)品 |
粉劑 |
x1 |
4℃ |
10mg葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)粉劑 |
注意
正式測(cè)定前務(wù)必取 3 - 5 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定。
預(yù)實(shí)驗(yàn)的意義
比色法檢測(cè)試劑盒預(yù)實(shí)驗(yàn)非常重要
1、確定該試劑盒是否適合客戶的樣本檢測(cè)，以免造成試劑盒和樣本的浪費(fèi)（比如低表達(dá)處理的樣本）；
2、熟悉生化試劑盒的操作流程，尤其是初次使用生化試劑盒測(cè)定；
3、確定樣本的處理方法及稀釋倍數(shù)是否合適；
4、了解實(shí)驗(yàn)過(guò)程中可能出現(xiàn)的實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象或問(wèn)題，以便于及時(shí)作出調(diào)整；
5、通過(guò)3 - 5組預(yù)實(shí)驗(yàn)，判斷試劑盒對(duì)于樣本的最佳適應(yīng)稀釋濃度范圍，指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)樣本稀釋比例。
