測定意義
血管緊張素轉(zhuǎn)化酶2(AngiotensinIConverting Enzyme 2,ACE2)是腎素-血管緊張素系統(tǒng)(RAS)的重要組成部分。ACE2是RAS的負(fù)調(diào)節(jié)因子,可平衡ACE的多種功能,通過調(diào)節(jié)血管緊張素Ⅱ,ACE2可以把血管緊張素Ⅱ裂解成Ang1-7,其具有保護(hù)心臟,舒張血管等活性作用,也是醫(yī)藥科學(xué)領(lǐng)域研 究的重點(diǎn)活性受體之一。
測定原理
ACE2催化底物分解,釋放出熒光產(chǎn)物,熒光值越大,樣品中ACE2酶活越高。通過標(biāo)準(zhǔn)品制作標(biāo)準(zhǔn)曲線,可計(jì)算樣品中ACE2酶活。
需自備的儀器和用品
天平、離心機(jī)、熒光酶標(biāo)儀、移液器、渦旋混勻儀、黑色96孔板、勻漿器。
試劑的組成和配制
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試劑名稱 |
規(guī)格 |
數(shù)目 |
貯藏 |
備注 |
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提取液 |
液體60mL |
x1 |
20 |
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試劑一 |
液體10m |
x1 |
-20℃ |
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試劑二 |
液體100μL |
x1 |
-20℃,避光 |
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標(biāo)準(zhǔn)品 |
液體200μL |
x1 |
-20℃,避光 |
10mM MCA |
預(yù)實(shí)驗(yàn)的意義
比色法檢測試劑盒預(yù)實(shí)驗(yàn)非常重要
1、確定該試劑盒是否適合客戶的樣本檢測,以免造成試劑盒和樣本的浪費(fèi)(比如低表達(dá)處理的樣本);
2、熟悉生化試劑盒的操作流程,尤其是初次使用生化試劑盒測定;
3、確定樣本的處理方法及稀釋倍數(shù)是否合適;
4、了解實(shí)驗(yàn)過程中可能出現(xiàn)的實(shí)驗(yàn)現(xiàn)象或問題,以便于及時(shí)作出調(diào)整;
5、通過3 - 5組預(yù)實(shí)驗(yàn),判斷試劑盒對于樣本的最佳適應(yīng)稀釋濃度范圍,指導(dǎo)實(shí)驗(yàn)樣本稀釋比例。
注意
正式測定前務(wù)必取 3 - 5 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定。
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