人Kra基因c.34GT(p.G12C)突變探針法qPCR檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品及特點(diǎn)
KRAS基因的全名叫Kirsten Rat Sarcoma Viral Oncogene Homolog，（Kirsten大鼠肉瘤病毒癌基因同源物），它編碼一種小GTP酶，該酶屬于RAS超蛋白家族。KRAS基因位于1號(hào)染色體上。大約有30%的癌癥患者都存在KRAS突變，其中包括90%的胰腺癌，50%的結(jié)腸癌和25%的肺癌。在非小細(xì)胞肺癌中，KRAS基因突變占20～30%，多存在于肺腺癌中，肺鱗癌中比較罕見。在KRAS突變類型中，c.34G>T(p.G12C)突變最常見，約占所有KRAS突變的44％，最常見的癌種是非小細(xì)胞肺癌，因此快速檢測(cè)此突變具有重要的意義。為此本公司開發(fā)了簡(jiǎn)單快捷的檢測(cè)該位點(diǎn)的點(diǎn)突變探針法qPCR檢測(cè)試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：

1. 即開即用，用戶只需要提供樣品DNA模板。

2. 引物和探針經(jīng)過優(yōu)化，分析靈敏性高，可以達(dá)到1000拷貝/μL。

3. 能檢測(cè)出5%的點(diǎn)突變。

4. 提供兩種陽(yáng)性對(duì)照，便于區(qū)分假陰性樣品。

5. 特異性高，引物是根據(jù)人Kras基因rs121913530位點(diǎn)設(shè)計(jì)，不會(huì)跟其他位點(diǎn)的DNA發(fā)生交叉反應(yīng)。

6. 本產(chǎn)品只能定性，不能定量。

7. 本產(chǎn)品足夠50次20μL體系的點(diǎn)突變探針法熒光定量PCR反應(yīng)。

8. 本產(chǎn)品只能用于科研。

規(guī)格及成分

成分	規(guī)格	包裝
2×點(diǎn)突變Probe qPCR MasterMix	0.5mL	0.5mL本色管
超純水	1mL	1.5mL藍(lán)蓋管
rs121913530位點(diǎn)檢測(cè)引物-探針混合液干粉	50次	0.5 mL白色管
rs121913530位點(diǎn)GG陽(yáng)性對(duì)照(1×10E4拷貝/μL)	250 μL	1.5mL棕色管
rs121913530位點(diǎn)TT陽(yáng)性對(duì)照(1×10E4拷貝/μL)	250 μL	0.5mL黃蓋管
使用手冊(cè)	1份	無
本產(chǎn)品采用五孔盒包裝

使用方法

樣品DNA的制備

1. 如果有N個(gè)樣品，則進(jìn)行N次純化，得到的DNA最后溶解在TE中，并需要用NanoDrop進(jìn)行定量。最后的濃度不能低于0.2ug/μL。

2. 本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)樣品DNA提取試劑盒兼容。

點(diǎn)突變Probe qPCR反應(yīng)20μL體系，在樣品制備室進(jìn)行

3. 如果只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+3個(gè)PCR管，其中N個(gè)用于上步得到的N樣品，1個(gè)用于PCR陰性對(duì)照（用水做模板，NC），3個(gè)用于陽(yáng)性對(duì)照（分別對(duì)應(yīng)兩種純合子基因型和一種雜合子基因型）。

4. 在標(biāo)記管中按下表加入各成分（本表只列出一次重復(fù)。樣品管和陰性對(duì)照設(shè)置完畢后才設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照，并且陽(yáng)性對(duì)照樣品要等所有管子蓋上蓋子儲(chǔ)存好后加。

數(shù)據(jù)處理

1. 一般的熒光定量PCR儀在基因分型的模式下，都可以自動(dòng)根據(jù)兩個(gè)通道獲得的熒光值，計(jì)算每個(gè)樣品的比值（HEX值/FAM值），并描出散點(diǎn)圖。突變基因型的比值點(diǎn)將位于散點(diǎn)圖的X軸方向，正?；蛐偷谋戎祵⑽挥赮軸方向，雜合子基因型的比值將位于中間，陰性對(duì)照的比值將位于原點(diǎn)附近。如果陰性對(duì)照有任何信號(hào)，則表示污染，本次實(shí)驗(yàn)無效，需要尋找原因。

2. 也可以手動(dòng)整理下表進(jìn)行基因型判斷。首先設(shè)置閾值，F(xiàn)AM的閾值根據(jù)GG陽(yáng)性對(duì)照的FAM熒光值設(shè)置，HEX的閾值根據(jù)TT陽(yáng)性對(duì)照的HEX熒光值設(shè)置。如果陰性對(duì)照有任何信號(hào)，則表示污染，本次實(shí)驗(yàn)無效，需要尋找原因。如果實(shí)驗(yàn)有效，則分析樣品。如果樣品Ct值低于35，則算有擴(kuò)增。高于35，則算無擴(kuò)增。

自備試劑
樣品DNA

運(yùn)輸及保存
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期1年

021-54845833/15800441009

ELISA試劑盒

PCR試劑盒

生化試劑盒

農(nóng)殘檢測(cè)試劑盒

細(xì)胞庫(kù)

基礎(chǔ)培養(yǎng)基

完全培養(yǎng)基

原代細(xì)胞

細(xì)胞專用培養(yǎng)基

細(xì)胞系

菌株

生化試劑

病理染色液

科研抗體

標(biāo)準(zhǔn)品

血清

形態(tài)病理檢測(cè)

分子病理

超微病理

細(xì)胞凋亡與檢測(cè)

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