甲型流感病毒/乙型流感病毒/新型冠狀病毒三重探針?lè)╭RT-PCR試劑盒

產(chǎn)品及特點(diǎn)

呼吸道感染常見(jiàn)的病原體主要包括病毒、支原體、細(xì)菌三大類，其中由病毒感染引發(fā)的呼吸道感染疾病占總數(shù)的85%以上。流行性較強(qiáng)的流感病毒包括甲型流感病毒和乙型流感病毒，這兩種病毒的臨床癥狀與新冠病毒感染的臨床癥狀相似增加了防控壓力。甲型流感病毒、乙型流感病毒及新型冠狀病毒的流行給人類健康造成不良影響，因此快速檢測(cè)和區(qū)分甲型流感病毒、乙型流感病毒及新型冠狀病毒具有重要的意義本產(chǎn)品就是以探針?lè)╭RT-PCR技術(shù)為基礎(chǔ)開(kāi)發(fā)的同時(shí)檢測(cè)甲流、乙流及新冠的檢測(cè)試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：

1. 即開(kāi)即用，用戶只需要提供樣品RNA模板。

2. 引物和探針經(jīng)過(guò)優(yōu)化，分析靈敏性高，可以達(dá)到100拷貝/反應(yīng)。

3. 提供陽(yáng)性對(duì)照，便于排除假陰性結(jié)果。

4. 特異性高，引物和探針?lè)謩e根據(jù)甲流病毒RNA、乙流病毒RNA及新冠病毒RNA高度保守區(qū)設(shè)計(jì)，不會(huì)跟其他生物的RNA發(fā)生交叉反應(yīng)。

5. 既可用于定性檢測(cè)，又可用于定量檢測(cè)。用于定量檢測(cè)時(shí)線性范圍至少為4個(gè)數(shù)量級(jí)。

6. 甲流病毒、乙流病毒及新冠病毒的三個(gè)基因分別用FAM、ROX和HEX標(biāo)記的三個(gè)探針檢測(cè)。

7. 本產(chǎn)品足夠50次20μL體系的探針?lè)≧T-PCR反應(yīng)。

8. 本產(chǎn)品只能用于科研。

規(guī)格及成分

成分	規(guī)格	包裝
探針?lè)?/span>qRT-PCR緩沖液	500μL	0.5mL藍(lán)蓋管
探針?lè)?/span>qRT-PCR酶混合液v2	100μL	0.5mL紅蓋管
熒光PCR專用模板稀釋液	1mL	1.5mL綠蓋管
甲流、乙流及新冠病毒三重RT-PCR引物-探針干粉	50次	0.5mL棕色管
甲型流感病毒陽(yáng)性對(duì)照（1×10E7拷貝/μL）	50μL	0.5mL棕色管
乙型流感病毒陽(yáng)性對(duì)照（1×10E7拷貝/μL）	50μL	0.5mL棕色管
新型冠狀病毒陽(yáng)性對(duì)照（1×10E7拷貝/μL）	50μL	0.5mL黃蓋管
使用手冊(cè)	1份	1份
本產(chǎn)品采用十孔盒包裝
注意：在使用前需要短暫離心引物-探針干粉管，然后在離心管中加入220uL的超純水充分混勻后再使用，未用完的需要-20℃保存

使用方法

稀釋甲型流感病毒標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品以10E1-10E6拷貝/μL這6個(gè)10倍稀釋度為例
由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬(wàn)不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽(yáng)性對(duì)照，只提供無(wú)傳染性的DNA片段作為陽(yáng)性對(duì)照。
1. 標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為A6，A5，A4，A3，A2，A1。
2. 用帶芯槍頭分別加入45μL熒光PCR專用模板稀釋液，用帶芯槍頭，下同）。
3. 在6號(hào)管中加入5μL1×10E7拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照(試劑盒提供)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在5號(hào)管中加入5μL1×10E6拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在4號(hào)管中加入5μL1×10E5拷貝/μL的陽(yáng)性對(duì)照(上步所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E4拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復(fù)上面的操作得到A1-A6共六個(gè)稀釋度標(biāo)準(zhǔn)曲線陽(yáng)性樣品。放冰上待用。

稀釋乙型流感病毒檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品

7. 如果有N個(gè)樣品，設(shè)置N+2個(gè)提取，多出的一個(gè)是PC（樣品制備陽(yáng)性對(duì)照），一個(gè)是NC（樣品制備陰性對(duì)照）?？梢杂?0 μL上步所得第4號(hào)稀釋液再加上一定量的水使總體積跟每次樣本制備所要求的起始樣本體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。

稀釋新型冠狀病毒檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品

8. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)DNA提取試劑盒兼容，也可以選購(gòu)本公司的免提取核酸釋放劑。

樣品RNA的制備

9. 如果有N個(gè)樣品，設(shè)置N+2個(gè)提取，多出的一個(gè)是新型冠狀病毒的PC（樣品制備陽(yáng)性對(duì)照），一個(gè)是NC（樣品制備陰性對(duì)照）?？梢杂米詡涞?、確定是陽(yáng)性的樣本作為樣品制備陽(yáng)性對(duì)照，可以用自備的、確定是陰性的樣本作為樣品制備陰性對(duì)照，可以用水替代。

數(shù)據(jù)處理

1. 如果所有標(biāo)曲擴(kuò)增或制備陽(yáng)性對(duì)照結(jié)果為陰性，則整個(gè)擴(kuò)增或制備實(shí)驗(yàn)無(wú)效，不需要分析數(shù)據(jù)，需要重做擴(kuò)增或制備或跟廠家聯(lián)系。如果擴(kuò)增陰性對(duì)照或制備陰性對(duì)照結(jié)果為陽(yáng)性，說(shuō)明環(huán)境污染，則整個(gè)擴(kuò)增或制備實(shí)驗(yàn)無(wú)效，不需要分析數(shù)據(jù)，需要跟廠家聯(lián)系，購(gòu)買新的引物和探針。

2. 如果陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照正常，則實(shí)驗(yàn)有效，可以進(jìn)入后續(xù)分析。

3. 如果把本試劑盒用于定量檢測(cè)，則以陽(yáng)性對(duì)照濃度的log值為橫軸，分別以甲型流感病毒、乙型流感病毒及新型冠狀病毒的陽(yáng)性對(duì)照（FAM通道、HEX通道和ROX通道）Ct值為縱軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，陽(yáng)性對(duì)照的標(biāo)準(zhǔn)曲線為斜線，r2必須大于0.95。再以待測(cè)樣品的Ct值從陽(yáng)性對(duì)照的標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品RNA濃度的log值，再推算出其濃度。

4. 對(duì)定性檢測(cè)，只判斷陽(yáng)性或陰性，則陰性對(duì)照FAM通道、HEX通道和ROX通道的Ct必須大于或等于40。甲型流感病毒、乙型流感病毒及新型冠狀病毒陽(yáng)性對(duì)照FAM通道、ROX通道和HEX通道的熒光信號(hào)必須有對(duì)數(shù)增長(zhǎng)，有典型擴(kuò)增曲線，Ct值應(yīng)該小于或等于35。對(duì)待測(cè)樣品，如果其FAM通道的ct值大于或等于40則為甲型流感病毒陰性，如果小于或等于35則為甲型流感病毒陽(yáng)性。如果其ROX通道的ct值大于或等于40則為乙型流感病毒陰性，如果小于或等于35則為乙型流感病毒陽(yáng)性。如果其HEX通道的ct值大于或等于40則為新型冠狀病毒陰性，如果小于或等于35則為新型冠狀病毒陽(yáng)性。

自備試劑
樣品RNA

運(yùn)輸及保存
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期2年

021-54845833/15800441009

ELISA試劑盒

PCR試劑盒

生化試劑盒

農(nóng)殘檢測(cè)試劑盒

細(xì)胞庫(kù)

基礎(chǔ)培養(yǎng)基

完全培養(yǎng)基

原代細(xì)胞

細(xì)胞專用培養(yǎng)基

細(xì)胞系

菌株

生化試劑

病理染色液

科研抗體

標(biāo)準(zhǔn)品

血清

形態(tài)病理檢測(cè)

分子病理

超微病理

細(xì)胞凋亡與檢測(cè)

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