產(chǎn)品及特點(diǎn)

耐萬古霉素腸球菌（Vancomycin-Resistant Enterococcus，VRE）又名萬古霉素抗藥性腸球菌，是腸球菌屬下的一種細(xì)菌，有著對萬古霉素這種抗生素的抗藥性。腸球菌是一種移生在腸道的革蘭氏陽性球菌，故名腸球菌。在十九世紀(jì)末發(fā)現(xiàn)，早期歸為鏈球菌屬。在腸球菌屬中，對人類有著病原性的有糞腸球菌（Enterococcus faecalis）及屎腸球菌（Enterococcus faecium）。而所有屎腸球菌更是有著抗藥性的，亦即所有屎腸球菌都是VRE。腸球菌屬的細(xì)菌主要是在腸內(nèi)，亦可以在人類的消化道及尿道內(nèi)發(fā)現(xiàn)。VRE特別對免疫系統(tǒng)受損的人有危險(xiǎn)性，但是它令健康的人受感染則較少見。一般來說可以引起心內(nèi)膜炎、敗血病及尿道感染等病癥。雖然相信有很大比例的雞只帶有VRE，但常見出現(xiàn)接觸的地方仍是在醫(yī)院（院內(nèi)感染）。因此快速檢測耐萬古霉素腸球菌vanA具有重要的意義。本產(chǎn)品就是以探針法qPCR技術(shù)為基礎(chǔ)開發(fā)的專門檢測耐萬古霉素腸球菌vanA的試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：

1. 即開即用，用戶只需要提供樣品DNA模板。

2. 引物和探針經(jīng)過優(yōu)化，分析靈敏性高，可以達(dá)到100拷貝/反應(yīng)。

3. 提供陽性對照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4. 特異性高，引物是根據(jù)耐萬古霉素腸球菌vanA DNA高度保守區(qū)設(shè)計(jì)，不會(huì)跟其他生物的DNA發(fā)生交叉反應(yīng)。

5. 既可用于定性檢測，又可用于定量檢測。用于定量檢測時(shí)線性范圍至少為5個(gè)數(shù)量級(jí)。

6. 本產(chǎn)品足夠50次20μL體系的探針法熒光定量PCR反應(yīng)。

7. 本產(chǎn)品只能用于科研。

規(guī)格及成分

成分	規(guī)格	包裝
2×Probe qPCR MasterMix	0.5mL	0.5mL本色蓋
熒光PCR專用模板稀釋液	1mL	1.5mL綠蓋管
超純水	1mL	1.5mL藍(lán)蓋管
耐萬古霉素腸球菌vanA qPCR引物-探針干粉	50次	1.5mL棕色管
耐萬古霉素腸球菌vanA qPCR陽性對照 (1×10E7拷貝/μL)	50μL	0.5mL黃蓋管
使用手冊	1份	無
本產(chǎn)品采用五孔盒包裝
注意：引物-探針干粉在使用前需要短暫離心，然后在離心管中加入162uL的超純水充分混勻后再使用，未用完的需要-20℃保存。

使用方法

稀釋標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品以10E1-10E6拷貝/ mL這6個(gè)10倍稀釋度為例
由于標(biāo)準(zhǔn)品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨(dú)立的區(qū)域進(jìn)行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴(kuò)散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供無傳染性的DNA片段作為陽性對照。

1. 標(biāo)記6個(gè)離心管，分別為6，5，4，3，2，1。

2. 用帶芯槍頭分別加入45 μL熒光PCR專用模板稀釋液，用帶芯槍頭，下同）。

3. 在6號(hào)管中加入5 μL 1×10E7拷貝/μL 的陽性對照(試劑盒提供)，充分震蕩1分鐘，得1×10E6拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

4. 換槍頭，在5號(hào)管中加入5 μL 1×10E6拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E5拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

5. 換槍頭，在4號(hào)管中加入5 μL 1×10E5拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩1分鐘，得1×10E4拷貝/μL的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

6. 重復(fù)上面的操作直到得到6個(gè)稀釋度的標(biāo)準(zhǔn)曲線樣品。放冰上待用。

樣品DNA的制備

7. 如果有N個(gè)樣品，最好設(shè)置N+2個(gè)提取，多出的一個(gè)是PC（樣品制備陽性對照），一個(gè)是NC（樣品制備陰性對照）?？梢杂?0μL上步所得4號(hào)稀釋液再加上一定量的水使總體積跟核酸制備試劑盒所要求的起始樣本體積一樣，以此作為PC。另外用水作為NC。

8. 用自選方法純化樣品的DNA，本試劑盒跟市場上大多數(shù)樣品DNA提取試劑盒兼容。也可以選購本公司的免提取核酸釋放劑。

Probe qPCR反應(yīng)20μL體系，在樣品制備室進(jìn)行

9. 如果做定量分析并且只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+9個(gè)PCR管，其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品，1個(gè)用于PCR陰性對照（用水做模板），6個(gè)用于標(biāo)準(zhǔn)曲線。如果做定性分析并且只做1次重復(fù)，則標(biāo)記N+4個(gè)PCR管，其中N+2個(gè)用于上步得到的N+2個(gè)樣品，1個(gè)用于PCR陰性對照（用水做模板），1個(gè)用于PCR陽性對照（直接用第6步第4號(hào)管的陽性對照稀釋液做模板）。下面只以定量分析為例描述操作步驟。

數(shù)據(jù)處理

1. 如果把本試劑盒用于定量檢測，則以陽性對照濃度的log值為橫軸，以Ct值為縱軸，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再以待測樣品的Ct值從標(biāo)準(zhǔn)曲線上推算出樣品DNA濃度的log值，再推算出其濃度。

2. 如果把本試劑盒用于定性檢測，只判斷陽性或陰性，則陰性對照必須無Ct或Ct大于或等于40。陽性對照必須有熒光對數(shù)增長，有典型擴(kuò)增曲線，Ct值應(yīng)該小于40，否則實(shí)驗(yàn)無效。如果實(shí)驗(yàn)有效，則分析待測樣品，如果無Ct或Ct大于或等于40，則為陰性。如果Ct小于40則為陽性。

自備試劑
樣品DNA

運(yùn)輸及保存
低溫運(yùn)輸，-20℃保存，有效期2年

021-54845833/15800441009

ELISA試劑盒

PCR試劑盒

生化試劑盒

農(nóng)殘檢測試劑盒

細(xì)胞庫

基礎(chǔ)培養(yǎng)基

完全培養(yǎng)基

原代細(xì)胞

細(xì)胞專用培養(yǎng)基

細(xì)胞系

菌株

生化試劑

病理染色液

科研抗體

標(biāo)準(zhǔn)品

血清

形態(tài)病理檢測

分子病理

超微病理

細(xì)胞凋亡與檢測

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